ឌីធីអូទ្រីអ៊ីតុល (DTT) គឺជាសារធាតុកាត់បន្ថយដែលត្រូវបានគេប្រើជាទូទៅ ដែលត្រូវបានគេស្គាល់ផងដែរថាជាសារធាតុបន្ថែមបៃតងថ្មី។ វាគឺជាសមាសធាតុសរីរាង្គម៉ូលេគុលតូចមួយដែលមានក្រុមមឺកាបតានពីរ (-SH)។ ដោយសារតែលក្ខណៈសម្បត្តិកាត់បន្ថយ និងស្ថេរភាពរបស់វា DTT ត្រូវបានគេប្រើប្រាស់យ៉ាងទូលំទូលាយនៅក្នុងការពិសោធន៍ជីវគីមី និងជីវវិទ្យាម៉ូលេគុល។
តួនាទីចម្បងរបស់ DTT គឺកាត់បន្ថយចំណងឌីស៊ុលហ្វីតនៅក្នុងប្រូតេអ៊ីន និងជីវម៉ូលេគុលដទៃទៀត។ ចំណងឌីស៊ុលហ្វីតគឺជាផ្នែកមួយដ៏សំខាន់នៃការបត់ និងស្ថេរភាពប្រូតេអ៊ីន ប៉ុន្តែក្រោមលក្ខខណ្ឌពិសោធន៍មួយចំនួន ដូចជាការវិភាគ SDS-PAGE ដែលអាចកាត់បន្ថយបាន ការរួមបញ្ចូលគ្នាឡើងវិញនៃប្រូតេអ៊ីន និងការបត់ វាចាំបាច់ក្នុងការកាត់បន្ថយចំណងឌីស៊ុលហ្វីតទៅជាក្រុម thiol ពីរ ដើម្បីស្រាយរចនាសម្ព័ន្ធលំហនៃប្រូតេអ៊ីន។ DTT អាចមានប្រតិកម្មជាមួយចំណងឌីស៊ុលហ្វីតដើម្បីកាត់បន្ថយពួកវាទៅជាក្រុម mercaptan ដោយហេតុនេះបើករចនាសម្ព័ន្ធលំហនៃប្រូតេអ៊ីន និងធ្វើឱ្យវាងាយស្រួលក្នុងការវិភាគ និងរៀបចំ។
DTT ក៏អាចត្រូវបានប្រើដើម្បីការពារសកម្មភាព និងស្ថេរភាពរបស់អង់ស៊ីមផងដែរ។ នៅក្នុងប្រតិកម្មអង់ស៊ីមមួយចំនួនដែលជំរុញដោយអង់ស៊ីម សកម្មភាពរបស់អង់ស៊ីមអាចត្រូវបានកាត់បន្ថយដោយសារធាតុអុកស៊ីតកម្ម។ DTT អាចមានប្រតិកម្មជាមួយសារធាតុអុកស៊ីតកម្មដើម្បីកាត់បន្ថយពួកវាទៅជាសារធាតុដែលគ្មានគ្រោះថ្នាក់ ដោយហេតុនេះការពារសកម្មភាព និងស្ថេរភាពរបស់អង់ស៊ីម។
បើប្រៀបធៀបទៅនឹងសារធាតុកាត់បន្ថយប្រពៃណីដូចជា β-mercaptoethanol (β-ME) DTT ត្រូវបានចាត់ទុកថាជាសារធាតុកាត់បន្ថយដែលមានសុវត្ថិភាព និងមានស្ថេរភាពជាងមុន។ វាមិនត្រឹមតែមានស្ថេរភាពនៅក្នុងដំណោះស្រាយទឹកប៉ុណ្ណោះទេ ប៉ុន្តែវាក៏រក្សាលក្ខណៈសម្បត្តិកាត់បន្ថយរបស់វានៅក្រោមលក្ខខណ្ឌសីតុណ្ហភាពខ្ពស់ និងអាស៊ីតបាសផងដែរ។
ការប្រើប្រាស់ DTT គឺសាមញ្ញណាស់។ ជាទូទៅ DTT ត្រូវបានរំលាយនៅក្នុងសារធាតុរាវសតិបណ្ដោះអាសន្នសមស្រប ហើយបន្ទាប់មកបន្ថែមទៅក្នុងប្រព័ន្ធពិសោធន៍។ កំហាប់ល្អបំផុតនៃ DTT ត្រូវកំណត់ទៅតាមការពិសោធន៍ជាក់លាក់ ហើយជាទូទៅត្រូវបានប្រើក្នុងចន្លោះពី 0.1-1 mM។ កំហាប់ទាបអាចកាត់បន្ថយផលប៉ះពាល់អវិជ្ជមានលើការលូតលាស់កោសិកា និងអាចកាត់បន្ថយជាតិពុលកោសិកាដោយសារតែការបញ្ចេញប្រូតេអ៊ីនគោលដៅច្រើនពេក។ កំហាប់ខ្ពស់អាចបណ្តាលឱ្យមានបន្ទុកមេតាបូលីសកោសិកាច្រើនពេក ដែលប៉ះពាល់ដល់ការលូតលាស់កោសិកា និងប្រសិទ្ធភាពនៃការបញ្ចេញមតិ។
វិធីដើម្បីកំណត់កំហាប់ល្អបំផុតអាចជាការវាយតម្លៃកម្រិតនៃការបញ្ចេញមតិនៃប្រូតេអ៊ីនគោលដៅដោយធ្វើតេស្តបញ្ចូល IPTG នៅកំហាប់ផ្សេងៗគ្នា។ ការធ្វើតេស្តវប្បធម៌ទ្រង់ទ្រាយតូចអាចត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើកំហាប់ IPTG ជាច្រើន (ឧទាហរណ៍ 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM ។ល។) ហើយឥទ្ធិពលនៃការបញ្ចេញមតិនៅកំហាប់ផ្សេងៗគ្នាអាចត្រូវបានវាយតម្លៃដោយការរកឃើញកម្រិតនៃការបញ្ចេញមតិនៃប្រូតេអ៊ីនគោលដៅ (ឧទាហរណ៍ Western blot ឬការរកឃើញ fluorescence)។ យោងតាមលទ្ធផលពិសោធន៍ កំហាប់ដែលមានប្រសិទ្ធភាពនៃការបញ្ចេញមតិល្អបំផុតត្រូវបានជ្រើសរើសជាកំហាប់ល្អបំផុត។
លើសពីនេះ អ្នកក៏អាចយោងទៅលើឯកសារពាក់ព័ន្ធ ឬបទពិសោធន៍របស់មន្ទីរពិសោធន៍ផ្សេងទៀត ដើម្បីយល់ពីជួរកំហាប់ IPTG ដែលប្រើជាទូទៅក្រោមលក្ខខណ្ឌពិសោធន៍ស្រដៀងគ្នា ហើយបន្ទាប់មកធ្វើឱ្យប្រសើរឡើង និងកែតម្រូវតាមតម្រូវការពិសោធន៍។
វាជាការសំខាន់ក្នុងការកត់សម្គាល់ថា កំហាប់ល្អបំផុតអាចប្រែប្រួលអាស្រ័យលើប្រព័ន្ធបញ្ចេញមតិផ្សេងៗគ្នា ប្រូតេអ៊ីនគោលដៅ និងលក្ខខណ្ឌពិសោធន៍ ដូច្នេះវាជាការល្អបំផុតក្នុងការធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងតាមករណីនីមួយៗ។
សរុបមក DTT គឺជាសារធាតុកាត់បន្ថយដែលត្រូវបានគេប្រើជាទូទៅ ដែលអាចប្រើដើម្បីកាត់បន្ថយចំណងឌីស៊ុលហ្វីតនៅក្នុងប្រូតេអ៊ីន និងជីវម៉ូលេគុលផ្សេងទៀត និងដើម្បីការពារសកម្មភាព និងស្ថេរភាពរបស់អង់ស៊ីម។ វាត្រូវបានគេប្រើប្រាស់យ៉ាងទូលំទូលាយនៅក្នុងការពិសោធន៍ជីវគីមី និងជីវវិទ្យាម៉ូលេគុល។
ពេលវេលាបង្ហោះ៖ ថ្ងៃទី ២៨ ខែកញ្ញា ឆ្នាំ ២០២៣