Dithiothreitol (DTT) គឺជាភ្នាក់ងារកាត់បន្ថយដែលប្រើជាទូទៅ ត្រូវបានគេស្គាល់ថាជាសារធាតុបន្ថែមពណ៌បៃតងថ្មី។វាគឺជាសមាសធាតុសរីរាង្គម៉ូលេគុលតូចមួយដែលមានក្រុម mercaptan ពីរ (-SH) ។ដោយសារតែលក្ខណៈសម្បត្តិកាត់បន្ថយ និងស្ថេរភាពរបស់វា DTT ត្រូវបានគេប្រើយ៉ាងទូលំទូលាយនៅក្នុងការពិសោធន៍ជីវគីមី និងម៉ូលេគុល។
តួនាទីសំខាន់របស់ DTT គឺកាត់បន្ថយចំណង disulfide នៅក្នុងប្រូតេអ៊ីន និងជីវម៉ូលេគុលផ្សេងទៀត។ចំណង disulfide គឺជាផ្នែកសំខាន់មួយនៃការបត់ប្រូតេអ៊ីន និងស្ថេរភាព ប៉ុន្តែនៅក្រោមលក្ខខណ្ឌពិសោធន៍មួយចំនួន ដូចជាការវិភាគ SDS-PAGE ដែលអាចកាត់បន្ថយបាន ការផ្សំប្រូតេអ៊ីន និងការបត់ឡើងវិញ វាចាំបាច់ក្នុងការកាត់បន្ថយចំណង disulfide ទៅក្រុម thiol ពីរ ដើម្បីស្រាយរចនាសម្ព័ន្ធលំហនៃ ប្រូតេអ៊ីន។DTT អាចប្រតិកម្មជាមួយនឹងចំណង disulfide ដើម្បីកាត់បន្ថយពួកវាទៅក្រុម mercaptan ដូច្នេះបើករចនាសម្ព័ន្ធលំហនៃប្រូតេអ៊ីន និងធ្វើឱ្យវាងាយស្រួលក្នុងការវិភាគ និងរៀបចំ។
DTT ក៏អាចត្រូវបានប្រើដើម្បីការពារសកម្មភាពអង់ស៊ីម និងស្ថេរភាព។នៅក្នុងប្រតិកម្មមួយចំនួននៃអង់ស៊ីម-កាតាលីករ សកម្មភាពរបស់អង់ស៊ីមអាចត្រូវបានកាត់បន្ថយដោយសារធាតុអុកស៊ីតកម្ម។DTT អាចប្រតិកម្មជាមួយអុកស៊ីតកម្មដើម្បីកាត់បន្ថយពួកវាទៅជាសារធាតុដែលមិនបង្កគ្រោះថ្នាក់ ដោយហេតុនេះការពារសកម្មភាព និងស្ថេរភាពនៃអង់ស៊ីម។
បើប្រៀបធៀបទៅនឹងភ្នាក់ងារកាត់បន្ថយបែបប្រពៃណីដូចជា β-mercaptoethanol (β-ME) DTT ត្រូវបានចាត់ទុកថាជាភ្នាក់ងារកាត់បន្ថយសុវត្ថិភាព និងស្ថេរភាពជាង។វាមិនត្រឹមតែមានស្ថេរភាពនៅក្នុងដំណោះស្រាយ aqueous ប៉ុណ្ណោះទេប៉ុន្តែថែមទាំងរក្សាលក្ខណៈសម្បត្តិកាត់បន្ថយរបស់វានៅក្រោមលក្ខខណ្ឌសីតុណ្ហភាពខ្ពស់និងអាស៊ីតមូលដ្ឋាន។
ការប្រើប្រាស់ DTT គឺសាមញ្ញណាស់។ជាទូទៅ DTT ត្រូវបានរំលាយនៅក្នុងសតិបណ្ដោះអាសន្នសមស្របមួយ ហើយបន្ទាប់មកបញ្ចូលទៅក្នុងប្រព័ន្ធពិសោធន៍។កំហាប់ល្អបំផុតនៃ DTT ចាំបាច់ត្រូវកំណត់យោងទៅតាមការពិសោធន៍ជាក់លាក់ ហើយជាទូទៅត្រូវបានគេប្រើក្នុងចន្លោះ 0.1-1mM ។កំហាប់ទាបអាចកាត់បន្ថយផលប៉ះពាល់អវិជ្ជមានលើការលូតលាស់កោសិកា និងអាចកាត់បន្ថយសារធាតុ cytotoxicity ដោយសារតែការបញ្ចេញប្រូតេអ៊ីនគោលដៅច្រើនពេក។កំហាប់ខ្ពស់អាចបណ្តាលឱ្យមានបន្ទុកមេតាបូលីសកោសិកាច្រើនពេក ដែលប៉ះពាល់ដល់ការលូតលាស់កោសិកា និងប្រសិទ្ធភាពនៃការបញ្ចេញមតិ។
មធ្យោបាយដើម្បីកំណត់កំហាប់ល្អបំផុតអាចជាការវាយតម្លៃកម្រិតនៃការបញ្ចេញមតិនៃប្រូតេអ៊ីនគោលដៅដោយការធ្វើតេស្ត IPTG induction នៅកំហាប់ផ្សេងៗគ្នា។ការធ្វើតេស្តវប្បធម៌ខ្នាតតូចអាចត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើជួរនៃការប្រមូលផ្តុំ IPTG (ឧទាហរណ៍ 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM ។ ការរកឃើញ blot ឬ fluorescence) ។យោងតាមលទ្ធផលពិសោធន៍ ការផ្តោតអារម្មណ៍ដែលមានប្រសិទ្ធិភាពកន្សោមល្អបំផុតត្រូវបានជ្រើសរើសជាការផ្តោតអារម្មណ៍ល្អបំផុត។
លើសពីនេះ អ្នកក៏អាចយោងទៅលើអក្សរសិល្ប៍ដែលពាក់ព័ន្ធ ឬបទពិសោធន៍នៃមន្ទីរពិសោធន៍ផ្សេងទៀត ដើម្បីយល់ពីជួរកំហាប់ IPTG ដែលប្រើជាទូទៅនៅក្រោមលក្ខខណ្ឌពិសោធន៍ស្រដៀងគ្នា ហើយបន្ទាប់មកបង្កើនប្រសិទ្ធភាព និងកែតម្រូវតាមតម្រូវការពិសោធន៍។
វាជាការសំខាន់ក្នុងការកត់សម្គាល់ថាការផ្តោតអារម្មណ៍ល្អបំផុតអាចប្រែប្រួលអាស្រ័យលើប្រព័ន្ធបញ្ចេញមតិផ្សេងៗគ្នា ប្រូតេអ៊ីនគោលដៅ និងលក្ខខណ្ឌពិសោធន៍ ដូច្នេះវាជាការល្អបំផុតក្នុងការបង្កើនប្រសិទ្ធភាពតាមករណីនីមួយៗ។
សរុបមក DTT គឺជាភ្នាក់ងារកាត់បន្ថយដែលប្រើជាទូទៅដែលអាចត្រូវបានប្រើដើម្បីកាត់បន្ថយចំណង disulfide នៅក្នុងប្រូតេអ៊ីន និងជីវម៉ូលេគុលផ្សេងទៀត និងដើម្បីការពារសកម្មភាពអង់ស៊ីម និងស្ថេរភាព។វាត្រូវបានគេប្រើយ៉ាងទូលំទូលាយនៅក្នុងការពិសោធន៍ជីវគីមី និងជីវវិទ្យាម៉ូលេគុល។
ពេលវេលាប្រកាស៖ ថ្ងៃទី ២៨ ខែកញ្ញា ឆ្នាំ ២០២៣